Test multiplex calitativ prin tehnica PCR in timp real pentru detectia patogenilor implicati in infectii respiratorii

In perioada iernii cand imunitatea organismului scade, acesta are o capacitate redusa de aparare impotriva agentilor infectiosi, astfel raceala, gripa sau pneumonia ne pot afecta cu o fervent marita. Principala cauza a infectiilor respiratorii este contactul direct cu agentul patogen prin inhalarea picaturilor de secretie nazofaringiana ce contin germeni patogeni. Acestea sunt expulzate in aer prin tuse, stranut sau chiar conversatie si pot ramane in aer pentru perioade lungi de timp. In Laboratorul SANADOR incepand cu luna februarie 2017 se lucreaza Testul multiplex calitativ prin tehnica PCR in timp real pentru detectia patogenilor implicati in infectii respiratorii. Acest test este unic prin faptul ca tinteste regiuni genetice conservate, care nu sunt afectate de variabilitatea antigenica anuala. Rezultatul este gata intr-un timp foarte scurt, comparativ cu celelalte metode: 2 zile. Majoritatea infectiilor respiratorii din sezonul rece sunt cauzate de virusurile gripale si virusul sincitial respirator (VSR). VSR este o cauza majora a bronsiolitelor, cea mai frecventa infectie a cailor respiratorii la sugari. Identificarea rapida, prin teste sensibile de biologie moleculara (PCR) poate reduce administrarea de antibiotice si grabirea vindecarii, in populatia cu risc ridicat (copii si batrani). Identificarea la nivel genetic a patogenului viral incriminat reprezinta metoda de certitudine pentru confirmarea/infirmarea testelor rapide de identificare a antigenului viral. Vorbim de doua virusuri cu o mare plasticitate antigenica, care pot "pacali" testele rapide (a se traduce prin potential fals pozitiv sau fals negativ datorita modificarilor antigenice frecvente). Avantajul Testului multiplex PCR este ca tinteste regiuni genetice conservate, care nu sunt afectate de variabilitatea antigenica anuala. Identificarea exacta a patogenului ghideaza medicul in stabilirea unui tratament eficient, tintit, reducandu-se cazurile de administrare a tratamentelor paleative. Indentificarea patogenului viral reduce, de asemenea, prescrierea de antibiotice cu spectru larg, care poate conduce la dobandirea de mecanisme de rezistenta in bacteriile comensale conditionat patogene (flora bacteriana). Testul multiplex calitativ prin tehnica PCR in timp real pentru detectia patogenilor implicati in infectii respiratorii se refera la: PANEL RESPIRATOR VIRUSURI:

• Virus gripal tip A (Influenza A virus)
• Virus gripal tip B (Influenza B virus)
• Virusul sincitial respirator tip A
• Virusul sincitial respirator tip B
• Virus gripal tip A, subtip H1
• Virus gripal tip A, subtip H1-pandemic 09
• Virus gripal tip A, subtip H3

Principiul metodei: Detectia unor secvente tinta specifice de la nivelul genomurilor agentilor patogeni cautati prin amplificarea prin PCR in timp real. Pentru Virusul gripal tip A se utilizeaza primeri pentru regiuni conservate de la nivelul genei matrix, specifica de tip, putandu-se detecta subtipurile A-H1, H3, dar si subtipurile H5N1 si H7N9. Pentru determinarea subtipului se folsoesc primeri pentru gena hemaglutininei (HA). Proba biologica recoltata si Conservare:-secretie nasofaringiana, aspirat nasofaringian, lavaj bronsic. Se recomanda recoltarea tamponului nazofaringian in recipientul dedicat- recoltor Eswab, Copan, cod 482C. Se pastreaza si se transporta la rece (+2..+8a°C). Mod de lucru: Din proba se preleveaza un volum de lucru din care se extrage materialul genetic (ADN si ARN), care urmeaza sa fie amplificat prin metoda PCR. Amplificarea specifica este inregistrata in timp real pe baza acumularii semnalului fluorescent specific fiecarei tinte moleculare in parte. Interpretarea rezultatelor: Un rezultat pozitiv indica prezenta genomului patogenului testat. Valori de referinta: ADN/ARN patogen in testare negativ. Testul a fost verifcat pentru specificitate, cu succes, pe urmatoarele tulpini: Virus gripal tip A (H1N1), Virus gripal tip A (H3N2), Virus gripal tip A tulpina pdm09 (H1pdm09), Virus gripal tip B, Virus sincitial respirator tip A, Virus sincitial respirator tip B. Limite si interferente: 1. Rezultatul acestui test trebuie corelat cu evaluarea clinica si cu alte proceduri de diagnostic. 2. Acest test nu identifica susceptibilitatea antivirala. 3. Detectia acidului nucleic bacterian este dependenta de cantitatea de genom din proba, care poate fi influentata de modul de colectare a probelor, manipularea acestora (transport, conservare) si preparare (dilutie, extractie). Executia inadecvata a acestor etape poate conduce la rezultate incorecte. Nota: Testul detecteaza prezenta materialului genetic viral, neputand discrimina intre entitati viabile/nonviabile. Repetarea testarii dupa tratament se recomanda a se efectua la cel putin 21 de zile dupa disparitia simptomatologiei clinice. Pentru mai multe detalii, va rugam sa contactati call center-ul la numarul 021.9699